從免疫原性突破到技術迭代：全人源抗體如何重塑靶向治療格局？
在治療性抗體領域，“降低免疫原性” 始終是研發(fā)的核心追求 —— 人源化抗體雖通過框架區(qū)改造將鼠源序列占比降至 5% 以下（如阿達木單抗），但臨床數據顯示仍有 3.2% 患者產生抗藥抗體（ADA），導致藥物清除率提升 50%、療效衰減。而全人源抗體憑借 100% 人類基因序列，將 ADA 發(fā)生率壓至 0.5% 以下（如地諾單抗），5 年隨訪中持續(xù)有效率比人源化抗體組高出 28%。這種優(yōu)勢使其成為重大疾病治療的 “主力選手”：目前 FDA 批準的 9 款全人源抗體覆蓋自身免疫病、腫瘤、骨質疏松等領域，其中阿達木單抗連續(xù) 8 年蟬聯(lián)全球藥王，2021 年銷售額突破 200 億美元，占全人源抗體市場 62% 的份額。
全人源抗體的崛起，離不開抗體庫技術、轉基因 / 轉染色體小鼠技術的迭代支撐。從 1994 年人 Ig 基因首次在小鼠體內功能性表達，到 2020 年 CHO 細胞產量突破 10g/L、成本降低 70%，每一次技術突破都推動其向 “更安全、更高效、更普惠” 邁進。本文聚焦三大核心抗體庫技術，解析全人源抗體制備的底層邏輯與技術優(yōu)勢。
一、噬菌體抗體庫技術：高通量篩選的 “經典標桿”
噬菌體抗體庫技術是全人源抗體制備的 “開山之作”，通過將抗體片段與噬菌體外殼蛋白融合，實現 “基因型 - 表型直接耦聯(lián)”，從海量文庫中快速篩選高親和力抗體，至今仍是工業(yè)界初篩的核心工具。
1. 核心原理：噬菌體 “攜帶” 抗體的篩選邏輯
其核心是構建 “抗體片段 - 噬菌體外殼蛋白” 融合載體：將抗體可變區(qū)基因（VH/VL）與 M13 噬菌體的 pIII 蛋白基因融合，噬菌體組裝時，抗體片段（如 scFv、Fab）會隨 pIII 蛋白呈現在顆粒表面；同時，噬菌體內部攜帶編碼該抗體的 DNA，實現 “展示的抗體 - 攜帶的基因” 一一對應。篩選時通過 “結合 - 洗滌 - 洗脫 - 擴增” 四步循環(huán)：將噬菌體文庫與固相化抗原孵育，未結合的噬菌體被洗脫，高親和力噬菌體通過酸解或競爭性抗原釋放后，感染大腸桿菌擴增，經 3-5 輪富集即可獲得目標抗體。
2. 技術優(yōu)勢：高容量與低成本的 “平衡之選”
- 庫容量領先：可構建 101?-1011 克隆的文庫，遠超酵母展示（10?克隆），能覆蓋稀有抗體序列，尤其適合篩選低免疫原性的全人源抗體；
- 篩選效率高：每輪篩選僅需數小時至 1 天，從文庫構建到獲得陽性克隆僅需 2-3 周，大幅縮短研發(fā)周期；
- 成本可控：依賴大腸桿菌培養(yǎng)，無需復雜真核細胞體系，操作簡單且耗材成本低，適合大規(guī)模初篩。
二、酵母抗體庫技術：真核折疊與精準分選的 “進階方案”
酵母抗體庫技術彌補了噬菌體原核系統(tǒng)的短板 —— 以釀酒酵母為宿主，憑借真核表達系統(tǒng)實現抗體的正確折疊與修飾，同時結合流式細胞術（FACS）實現 “多參數精準分選”，成為全人源抗體優(yōu)化的關鍵工具。
1. 核心原理：酵母細胞壁上的 “抗體展示臺”
通過將抗體片段（scFv、Fab）與酵母細胞壁蛋白 Aga2p 融合，Aga2p 再通過二硫鍵與錨定在細胞壁的 Aga1p 結合，使抗體片段穩(wěn)定展示在細胞表面，每個酵母細胞僅展示一種抗體變體。篩選時用熒光標記的抗原與酵母孵育，結合 FACS 分選高熒光信號的細胞 —— 可同時檢測 “抗體表達量” 與 “抗原結合力”，避免篩選到表達量低或親和力弱的克隆；經 2-4 輪分選后，擴增陽性克隆并驗證功能。
2. 技術優(yōu)勢：真核修飾與功能篩選的 “雙重保障”
- 折疊正確性高：酵母內質網可催化二硫鍵形成，支持部分糖基化修飾，避免原核系統(tǒng)中抗體錯誤折疊導致的活性丟失，尤其適合含復雜結構的全人源抗體（如雙抗片段）；
- 分選精度高：FACS 支持多參數篩選（如親和力、pH 敏感性、穩(wěn)定性），可直接篩選出符合臨床需求的功能抗體，減少后續(xù)驗證工作量；
- 可體外進化：結合易錯 PCR 等誘變技術，可在酵母庫中實現抗體的定向進化，快速提升親和力（如將 nM 級親和力優(yōu)化至 pM 級）。
三、核糖體展示技術：無細胞系統(tǒng)的 “靈活創(chuàng)新者”
核糖體展示技術是唯一無需活細胞的體外展示系統(tǒng)，通過構建 “mRNA - 核糖體 - 抗體” 三元復合物，突破宿主細胞限制，成為全人源抗體快速進化與超大文庫篩選的 “新銳力量”。
1. 核心原理：體外翻譯中的 “基因 - 蛋白關聯(lián)”
在無細胞翻譯系統(tǒng)（如兔網織紅細胞裂解液）中，抗體基因的 mRNA 被翻譯為蛋白質，但通過設計缺乏終止密碼子或添加嘌呤霉素，使新生抗體鏈無法脫離核糖體，形成穩(wěn)定的三元復合物 —— 復合物中抗體的功能由其 mRNA 編碼，篩選到目標抗體后，可直接提取 mRNA 逆轉錄為 DNA，實現基因回收。篩選流程與噬菌體類似，但無需細菌感染步驟，每輪篩選僅需數小時。
2. 技術優(yōu)勢：無限制與高靈活的 “突破者”
- 庫容量無上限：無需考慮細胞轉化效率，庫容量可達 1012-101?克隆，適合篩選極稀有抗體序列；
- 進化效率高：可直接在體外通過 DNA shuffling、易錯 PCR 引入突變，結合多輪篩選實現抗體的快速迭代優(yōu)化，比酵母進化周期縮短 50%；
- 無宿主毒性：可展示對細胞有毒性的抗體片段（如強效殺傷性抗體），避免宿主細胞篩選中的 “毒性排斥” 問題。
總結：全人源抗體技術的未來方向
從噬菌體的高通量初篩，到酵母的真核優(yōu)化，再到核糖體的體外進化，三大技術形成 “初篩 - 優(yōu)化 - 創(chuàng)新” 的完整鏈條。未來，隨著 AI 輔助抗體設計（預測最優(yōu)可變區(qū)序列）、CHO 細胞高密度培養(yǎng)（產量突破 20g/L）等技術的融合，全人源抗體將向 “多功能化”（如雙抗、ADC 偶聯(lián)）、“適應癥拓展”（如神經系統(tǒng)疾病、罕見病）方向發(fā)展，進一步擴大治療邊界。
泰克生物提供全人源抗體制備全流程技術支持，涵蓋噬菌體 / 酵母 / 核糖體抗體庫構建、高親和力克隆篩選及功能驗證，助力低免疫原性抗體藥物研發(fā)。
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